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大豆7S伴球蛋白(7S-conglycinin)酶聯(lián)免疫檢測
  • 發(fā)布日期:2019-04-19      瀏覽次數(shù):1473
    • 大豆7S伴球蛋白(7S-conglycinin)酶聯(lián)免疫檢測

      試劑盒使用說明書

                                                                     AE98605G

      使用前仔細閱讀本說明書酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來檢測大豆7S伴球蛋白(7S-conglycinin),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

         用于測定植物組織,細胞及其它相關(guān)樣本中大豆7S伴球蛋白(7S-          conglycinin)含量測定。

      工作原理:

      本試劑盒采用的生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA)測定樣品中大豆7S伴球蛋白(7S-conglycinin)水平。向預(yù)先包被了大豆7S伴球蛋白(7S-conglycinin)單克隆抗體的酶標孔中加入大豆7S伴球蛋白(7S-conglycinin),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗7S-CONGLYCININ抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中大豆7S伴球蛋白(7S-conglycinin)的濃度呈正相關(guān)。

       

      試劑盒組成: 

      試劑盒組成

      48孔配置

      96孔配置

      保存

      說明書

      1

      1

       

      封板膜

      2片(48

      2片(96

       

      密封袋

      1

      1

       

      酶標包被板

      1×48

      1×96

      2-8℃保存

      標準品:480 ng/L

      0.5ml×1

      0.5ml×1

      2-8℃保存

      標準品稀釋液

      3ml×1

      6ml×1

      2-8℃保存

      鏈霉親和素-HRP

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8℃保存

      生物素標記的抗7S-CONGLYCININ抗體

      0.5ml×1

      1 ml×1

      2-8℃保存

      顯色劑A

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8℃保存

      顯色劑B

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8℃保存

      終止液

      3ml×1

      6ml×1

      2-8℃保存

      濃縮洗滌液

      20ml×20倍)×1

      20ml×30倍)×1

      2-8℃保存

       

      需要而未提供的試劑和器材:

      • 37恒溫箱。
      • 標準規(guī)格酶標儀。
      • 精密移液器及一次性吸頭
      • 蒸餾水,
      • 一次性試管
      • 吸水紙

       

      注意事項:

      • 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
      • 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差
      • 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
      • 免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
      • 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
      • 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

       

      洗板方法:

      手工洗板方法:甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

      自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中

       

      標本要求

      1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行   實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)   凍融。

       

      操作程序:

      • 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

      240ng/L

      5號標準品

      120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

      120ng/L

      4號標準品

      120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

      60ng/L

      3號標準品

      120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

      30ng/L

      2號標準品

      120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

      15ng/L

      1號標準品

      120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

       

      • 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
      • 加樣:
      • 1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗7S-CONGLYCININ抗   體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相   同;
      • 2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事   先整合好生物素抗體,故不加);
      • 3)待測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗7S-CONGLYCININ抗體   10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫   育60分鐘。
      • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
      • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30     秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
      • 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混     勻,37℃避光顯色15分鐘. 
      • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)
      • 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD         值)。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
      • 根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。

       

      操作程序總結(jié):

       

      檢測范圍10ng/L -245 ng/L

      保 存:2-8

      有效期:6個月(2-8℃)。