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脂質體轉染的特征有哪些?
  • 發(fā)布日期:2023-11-01      瀏覽次數(shù):455
    • 定義:
      最初,人們只是運用脂質體模擬生物膜,研究膜的構造及功能,從而發(fā)現(xiàn)了膜的融合及內吞作用,因而可用作外源物質進入細胞的載體。

      特性:
      陽離子脂質體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用將DNA分子包裹入內,形成DNA一脂復合體,也能被表面帶負電荷的細胞膜吸附,再通過膜的融合或細胞的內吞作用,偶爾也通過直接滲透作用,DNA傳遞進入細胞,形成包涵體或進入溶酶體 其中一小部分DNA能從包涵體內釋放,并進入細胞質中,再進一步進入核內轉錄、表達。

      已有眾多的文獻報道,脂質體本身會參與細胞生理活動,引起基因表達的上調或下調。如參與PKC(蛋白激酶C)通路調節(jié)(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如與線粒體膜發(fā)生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15);轉染siRNA造成脫靶效應等等。細胞毒性的大小往往意味著對細胞生理活動影響的大小,脂質體這些作用是造成細胞毒性的根本原因。這會對相關研究數(shù)據產生嚴重的干擾,甚至影響研究的結論。這已引起了許多研究者的注意。

      雖然人們早已發(fā)現(xiàn)脂質體對細胞的毒性,對研究的影響,但由于一直沒有更好的方法尤其是更高效的轉染方法代替脂質體,所以脂質體轉染試劑一度應用非常廣泛。同時,人們也一直在尋找更有效、毒性小同時對研究影響也小的轉染試劑。由于脂質類轉染試劑對細胞的毒性是由其脂質特性決定的,眾多的研究者和生物公司將新一代轉染試劑的開發(fā)聚焦在非脂質體的聚合物上,一種納米材料的聚合物已經研發(fā)出來,其原理是:分子內含有許多氨基,在生理PH下會發(fā)生質子化,這些質子化的氨基可以中和DNA質粒表面的負電荷,使DNA分子由伸展結構壓縮為體積相對較小的DNA粒子,并包裹在其中,使DNA免受核酸酶的降解。轉染復合物主要是通過細胞內吞作用將DNA轉移進入細胞,形成內含體(endosome),DNA從內含體釋放,進入細胞質中,再進一步進入核內轉錄、表達。通過納米技術生產出的轉染試劑在納米尺度表現(xiàn)出結合保護DNA能力強、毒性低的性能。