作用:
蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增強(qiáng)探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì),提高雜交信號(hào)。
但蛋白酶K濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高時(shí),都會(huì)對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果。
EDTA緩沖液可以代替蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問(wèn)題,并能達(dá)到理想的染色效果。
保存方法:
保存在-20℃的冰箱里,避免反復(fù)凍融,有效保證12個(gè)月。
孵育溫度為55-65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí),理想孵育時(shí)間為2小時(shí)
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